核酸等温扩增技术有哪些 _等温

核酸等温扩增技术有哪些

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环介导等温扩增技术（LAMP）。
依赖于核酸序列的扩增技术（NASBA）。
滚环扩增技术（RCA）。
单引物等温扩增技术（SPIA）。
依赖于解旋酶的等温扩增技术（HAD）。
链接代扩增技术（SDA）。
快速等温检测放大技术（RIDA）。
切刻内切酶核酸恒温扩增技术（NEMA）。
【核酸等温扩增技术有哪些】
叙述新的核酸扩增技术有哪些简要写出它们的用途目前成熟核酸扩增技术之一是PCR ，新技术可以说是更新一代的PCR 。PCR目前已经有四代了，最新一代可以做到微滴PCR只需很少样本即可特异性扩增。还有一些特殊的PCR ，比如热不对称交错PCR ，菌落PCR ，原位PCR ，不对称PCR ， RT-qPCR ， RT-PCR等等。还有单细胞全基因组测序所用的核酸扩增技术是另一种比较特殊的扩增技术，和PCR原理不同，叫多重退火和成环循环扩增技术。
等温扩增技术和定量pcr技术哪种好一点评价一个技术好坏，主要是看快速性、特异性、灵敏性。
与常规PCR相比，不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程。环介导等温扩增法是一种全新的核酸扩增方法，具有简单、快速、特异性强的特点。
该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，不依赖任何专门的仪器设备实现现场高通量快速检测，检测成本远低于荧光定量PCR 。

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扩展资料：
扩增原理：
LAMP 技术扩增反应的具体过程比较复杂，下文将结合图2 所示，按具体的反应过程对其LAMP原理进行详解。
在启动阶段，双链DNA 模板在等温（ 60～65 ℃）的条件下，内部引物FIP 退火， FIP 中的F2序列跟模板链上Flc 位点结合（ 2 ）。
在具有链置换活性的DNA 聚合酶作用下启动核酸的合成（ 2 ），外部引物m 也缓慢地退火，与目的序列杂交（ 3 ），启动链置换反应，产生一条双链DNA(4），并置换释放一条单链DNA(5）；单链DNA 一端自动形成环的结构。
核酸含量的测定方法及原理核酸含量的测定方法如下：
一、采集标本。
1、鼻、咽拭子采样：鼻、咽拭子采样是指提取患者鼻腔或咽部分泌物以继续进行后续的检测；采样前2小时建议患者应避免饮食， 30分钟前应避免喝水、抽烟等，以免检测时刺激鼻腔或咽部引起恶心、呕吐等不适情况。

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2、血液检查：抽取患者外周血液，进而检测患者血液中的抗体水平，但患者体内抗体的产生具有一定的滞后性，一般会在感染后几天才能检测出来。
3、肛拭子采样：是指提取患者肛周分泌物，以便进行后续相关检测的一种方法。
二、实验室检测。
1、逆转录-PCR：实时荧光定量PCR是目前官方使用的SARS-CoV-2确诊方法，可以判断患者标本中是否含有SARS-CoV-2 ，并降低检测过程中可能出现的污染和假阳性，具有操作简便快捷，特异度强，灵敏度高等优点。
2、等温扩增：等温扩增技术检测成本比较低，所需设备相对简单，可实现对病原体的现场快速检测，大大提高检测效率。

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3、基因芯片：基因芯片属于一种新型检测分析手段，具有准确、快速的特点，与传统的病原培养法和流感临床拟诊相比，具有更高的符合率、特异度及阴性预测值。
三、核酸检测注意事项。
在进行核酸检测之前为了避免人员聚集，降低感染的风险，患者可在网上进行预约；进行核酸检测时需要做好个人防护，佩戴好口罩，并与其他人保持一米以上的距离；核酸检测完应及时离开检测场所，避免逗留引起人员聚集。
核酸检测的检测方式怎么才能检测出来呢1、核酸序列依赖性扩增法， NASBA是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异性核苷酸序列等温扩增RNA的新技术。反应在 42 ℃进行 ,可在2h内将RNA模板扩增约109倍。NASBA原理是提取病毒RNA,加入AMV逆转录酶、RNA酶H、T7RNA聚合酶和引物进行扩增。整个反应分非循环相和循环相:在非循环相中,引物I与模板RNA退火后在AMV逆转录酶的作用下合成cDNA,形成RNA:DNA杂合体,随即RNaseH降解RNA,引物Ⅱ与cDNA 退火, 在反转录酶作用下合成第2条DNA互补链。双链DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,经其启动子序列起动而转录RNA ， RNA又可在反转录酶的作用下反转录成DNA ，进入循环相,对模板进行大量扩增。
2、转录介导的扩增技术， TMA技术原理与NASBA基本一致，略有不同之处是TMA利用的是MMLV逆转录酶及T7 RNA聚合酶两种酶， MMLV逆转录酶既有逆转录酶的活性又具有RNA酶H活性。反应在41.5 ℃进行,可在1h内将RNA模板扩增约109倍。
3、连接酶酶促链式反应(LCR) ， LCR是基于靶分子依赖的寡核苷酸探针相互连接的一种探针扩增技术，是继PCR后新发展的一种较有前景的体外扩增技术。它的原理就是由2段寡核苷酸单链DNA探针与目标序列杂交,当该2段DNA探针与没有发生突变的模板褪火后,如果2探针是紧邻的,中间没有核苷酸间隔,则可在连接酶作用下连接起来,连接以后的新链又可以作为模板,引导下一周期的连接产生新的子链。若连接区段发生核苷酸的碱基突变,则连接反应不能发生,扩增反应终止。